敲减及过表达实验程序设计简图

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根据目的序列设计 3-4 靶位点

构建表达目的基因质粒, 根据靶点序列覆盖位置, 选择构建表达质粒

转染细胞

按照设计靶点序列,构建 3-4 个病毒质粒

293T 工具细胞

分别导入工具细胞进行 Westernblot 筛靶，选取最有效的靶点序列

表达目的基因选择部分基因序列的 293T 筛靶工具

细胞

获得有效靶点序列（质粒水平）

目的序列病毒大包装

在目的细胞中做 Westerblot 和 Realtime 内源

验证靶点的有效性

带感染细胞制作，混合克隆细胞

构建目的基因全部序列到病毒载体

把病毒质粒导入 293T 细胞中检测基因表达情况。这包括有荧光表达检测，Westernblot 检测，确定基因确实表达

病毒小包装

进行 qPCR 滴度检测，确定目的基因

能包装

病毒大量包装

利用 QPCR 检测大量包装最后滴度利用 Westernblot 检测基因表达情况

带感染目的细胞，制备混合克隆细胞株

本文来源：https://www.wddqw.com/doc/d96830518d9951e79b89680203d8ce2f00666513.html

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