愈创木酚法测定过氧化物酶活性（准确，无误） 愈创木酚法测定过氧化物酶活性 一、实验目的 过氧化物酶它与呼吸作用、光合作用及生长素的水解等都存有密切关系，在植物生长发育过程中，它的活性可以充分反映某一时期植物体内新陈代谢的变化。通过本实验介绍过氧化物酶的促进作用，掌控木酚木酚法测定过氧化物酶。二、实验原理 在过氧化物酶（pod）催化下，h2o2将愈创木酚氧化成茶褐色产物。此产物在470nm处有最大光吸收值，故可通过测470nm下的吸光度变化测定过氧化物酶的活性。三、实验材料马铃薯块茎。四、设备与试剂 分光光度计，离心机，研钵，容量瓶，量筒，试管，液体。 0.05moll的磷酸缓冲液（ph5.5）；0.05moll愈创木酚溶液；2％h2o2；20％三氯乙酸五、实验步骤（一）酶液的制备 挑1.0～5.0g晒干去皮的马铃薯块茎，磨碎，放进研钵中，提适度的磷酸缓冲液研磨成匀浆。将坯浆液全部转至离心管中，于3000×gVergt10min，上清液转至25ml容量瓶中。结晶用5ml磷酸缓冲液再抽取两次，上清液划入容量瓶中，定容至刻度，低温下留存水泵。（二）过氧化物酶活性测量 酶活性测定的反应体系：依次加入2.9ml0.05moll-1磷酸缓冲液；1.0ml2％h2o2；1.0ml0.05moll-1愈创木酚和0.1ml酶液。用加热煮沸5min的酶液为对照，反应体系加入酶液后，立即于34℃水浴中保温3min，然后迅速稀释1倍，470nm波长下比色，每隔1min记录1次吸光度a470，共记录5次，然后以每分钟内a470变化0.01为1个酶活性单位（u）。六、实验结果 以每分钟内a470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位（u）。△a470×vt过氧化物酶活性(ug-1min-1)=──────w×vs×0.01×t式中：△a470――反应时间内喷光度的变化； w――马铃薯鲜重（g）；t――反应时间（min）；vt――提取酶液总体积（ml）；vs――测定时取用酶液体积（ml）。七、注意事项 酶液的的抽取过程必须尽量在低温温条件下展开。h2o2必须在反应已经开始ka，无法轻易重新加入。 本文来源：https://www.wddqw.com/doc/d2c7f22b021ca300a6c30c22590102020640f268.html